半制備液相色譜儀是一種用于分離和純化化合物的高效液相色譜系統(tǒng)。主要用于制備和純化目標(biāo)化合物,而不是僅僅對(duì)其進(jìn)行定性和定量分析。這種儀器在化學(xué)、制藥、生物技術(shù)、環(huán)境科學(xué)等領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用。
工作原理與分析型液相色譜儀相似,都是基于樣品在固定相和流動(dòng)相之間的分配差異來實(shí)現(xiàn)分離。具體來說,樣品首先被溶解在流動(dòng)相中,然后通過高壓泵將其送入裝有固定相的色譜柱。隨著流動(dòng)相的不斷流動(dòng),樣品中的各個(gè)組分在固定相和流動(dòng)相之間進(jìn)行反復(fù)的分配,從而實(shí)現(xiàn)分離。分離后的組分通過檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè),并記錄其色譜圖。
主要由以下幾個(gè)部分組成:
高壓恒流泵:用于提供穩(wěn)定的高壓流動(dòng)相,確保樣品在色譜柱中的有效分離。
進(jìn)樣器:用于將樣品引入色譜系統(tǒng)。常見的進(jìn)樣器有手動(dòng)進(jìn)樣器和自動(dòng)進(jìn)樣器。
色譜柱:裝有固定相,用于實(shí)現(xiàn)樣品的分離。色譜柱的選擇和填充直接影響分離效果。
檢測(cè)器:用于檢測(cè)分離后的組分。常見的檢測(cè)器有紫外檢測(cè)器(UV)、熒光檢測(cè)器(FLD)、質(zhì)譜檢測(cè)器(MS)等。
數(shù)據(jù)處理系統(tǒng):用于記錄和分析檢測(cè)器輸出的信號(hào),生成色譜圖和相關(guān)數(shù)據(jù)。
半制備液相色譜儀具有以下幾個(gè)顯著的特點(diǎn)和優(yōu)勢(shì):
高效分離:通過選擇合適的固定相和流動(dòng)相,可以實(shí)現(xiàn)對(duì)復(fù)雜樣品的高效分離。
高純度制備:能夠從混合物中純化出高純度的目標(biāo)化合物,適用于藥物、天然產(chǎn)物等的制備。
靈活性強(qiáng):可以根據(jù)不同的分離需求,選擇不同規(guī)格的色譜柱和檢測(cè)器,適應(yīng)性強(qiáng)。
自動(dòng)化程度高:通常配備自動(dòng)進(jìn)樣器和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng),操作簡(jiǎn)便,效率高。
適用范圍廣:廣泛應(yīng)用于化學(xué)、制藥、生物技術(shù)、環(huán)境科學(xué)等領(lǐng)域,具有廣泛的應(yīng)用前景。
在多個(gè)領(lǐng)域都有著廣泛的應(yīng)用,主要包括以下幾個(gè)方面:
藥物制備:用于制備和純化藥物中間體和成品藥物,確保藥物的純度和質(zhì)量。
天然產(chǎn)物分離:用于從植物、動(dòng)物等天然資源中分離和純化活性成分,如生物堿、黃酮類化合物等。
環(huán)境監(jiān)測(cè):用于檢測(cè)和分離環(huán)境樣品中的污染物,如農(nóng)藥、重金屬等。
食品檢測(cè):用于檢測(cè)和分離食品中的添加劑、殘留物等,確保食品安全。
生物技術(shù):用于分離和純化蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子,支持生物技術(shù)研究和應(yīng)用。
半制備液相色譜儀的操作步驟主要包括以下幾個(gè)環(huán)節(jié):
準(zhǔn)備工作:
打開計(jì)算機(jī)和儀器的電源。
檢查流動(dòng)相是否足夠,儀器上記錄的溶劑量是否正確。
打開儀器的電源開關(guān),一般是從上到下,最下面是檢測(cè)器開關(guān)。
系統(tǒng)平衡:
打開電腦,進(jìn)入儀器在線軟件界面。
將泵流量設(shè)置為10mL/min,確保有液體流出儀器。
點(diǎn)擊平衡,然后點(diǎn)擊每個(gè)波長(zhǎng)和調(diào)整,沖洗一段時(shí)間,直到壓力穩(wěn)定。
進(jìn)樣:
將注射器擰至負(fù)載向上,吸取一定量的待分離液體,并快速注射。
點(diǎn)擊控制界面-樣本信息-設(shè)置信息存儲(chǔ)路徑。
扭動(dòng)進(jìn)樣器使其處于inload狀態(tài),保留時(shí)間開始計(jì)數(shù)。
拾峰,待所有峰出來后,點(diǎn)擊菜單欄中的中斷-中斷,準(zhǔn)備重復(fù)進(jìn)樣。
關(guān)閉系統(tǒng):
點(diǎn)擊中斷并沖洗幾分鐘,將流速設(shè)置為0。壓力為0后,將吸入壓頭轉(zhuǎn)移至甲醇,并將流速設(shè)置為10mL/min。
通常需要半個(gè)小時(shí)直到什么都沒被沖走,此時(shí)壓力已經(jīng)穩(wěn)定。
將流量設(shè)置為0,點(diǎn)擊界面上的關(guān)閉(啟動(dòng)旁邊)。
關(guān)閉窗口,所有彈出窗口都會(huì)點(diǎn)擊是。